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Alizarin 染色

Introduction

アリザリン (alizarin) は、金属基に結合する赤色の色素で、骨分化や石灰化した細胞に沈着したカルシウムを染色することができる。Alizarin red S は pH 4-8 でしかカルシウムラックを作らず、強酸性下ではカルシウム塩が溶出する。カルシウムが豊富な場合は特異性が高いが、カルシウムが少ないと他の金属との共染が生じるため、鉄や重金属の使用を避ける。
Alizarin is a red pigment that binds to metallic groups and can stain calcium deposited in osteogenized or calcified cells. Alizarin red S only produces calcium racks at pH 4-8, and calcium salts elute under strong acidity. If it is rich in calcium, it is highly specific, but if it is low in calcium, it will co-stain with other metals, so avoid using iron and heavy metals.

Materials

Alizarin red S 染色液の調整 Alizarin red S stain liquid の調整

  1. 100 ml の MQ に 1 g の Alizarin red S (Wako, 011-01192) を加えて撹拌する。
    Add 1 g of Alizarin red S (Wako, 011-01192) to 100 ml of MQ and stir.

    この段階では完全に溶解しない。 At this stage, it does not dissolve completely.
  2. 28% アンモニア水 (ナカライ, 0251-05, 4°C) を MQ で 1/1000 に希釈する。
    Dilute 28% ammonia water (Nakarai, 0251-05, 4°C) to 1/1000 with MQ.
  3. Alizarin red S 溶液にアンモニア希釈液を加え、pH 6.3-6.4 に調整する。
    Add ammonia diluent to Alizarin red S solution and adjust to pH 6.3-6.4.

Protocol

1 ml/3 cm dish or 6-well plate、300 ul/24-well plate。

  1. PBS(-) で wash, 2回。 Wash with PBS(-), twice.
  2. 2% PFA を加えて固定する。RT, 10 min。
    Add 2% PFA and fix. RT, 10 min。
  3. MQ で wash, 2回。 Wash in MQ, twice.
  4. Alizarin red S 染色液を加えてインキュベーション。RT, 5-10 min。
    Incubation with the addition of Alizarin red S staining solution. RT, 5-10 min。

    細胞の様子を見て染色時間を調節する。 Adjust the staining time by looking at the state of the cells.
  5. MQ で wash, 3回。 Wash in MQ, 3 times.
  6. MQ に細胞が浸かっている状態で、顕微鏡 (Color, Bright field) で観察・撮影する。
    While the cells are immersed in MQ, observe and photograph them with a microscope (Color, Bright field).

Examples

Alizarin staining of MC3T3-E1 cells
Fig 1. MC3T3-E1 細胞の Alizarin 染色 / Alizarin staining of MC3T3-E1 cells

References

Nihashi Y, Miyoshi M, Umezawa K, Shimosato T, Takaya T*. Identification of a novel osteogenetic oligodeoxynucleotide (osteoDN) that promotes osteoblast differentiation in a TLR9-independent manner. Nanomaterials. 2022; 12: 1680.